PCR實驗(yan)室(shi)介紹(shao)

基因擴(kuo)增(zeng)實驗(yan)又稱(cheng)PCR實驗(yan)，其特(te)點(dian)是能(neng)將(jiang)微量(liang)的(de)DNA大(da)幅(fu)增(zeng)加(jia)，PCR是分子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)研究和實驗(yan)的常(chang)規(gui)方(fang)法，廣泛(fan)應用於(yu)生(sheng)物(wu)學(xue)各個(ge)領(ling)域(yu)，例(li)如(ru):艾(ai)滋病檢(jian)測(ce)、乙型(xing)肝(gan)炎(yan)、禽(qin)疫(yi)病、癌(ai)基因的(de)檢(jian)測(ce)和診斷，DNA指紋(wen)、個體識(shi)別(bie)、親(qin)子鑒定(ding)及(ji)法(fa)醫物(wu)證(zheng)，動、植(zhi)物檢疫(yi)，動物(wu)及(ji)其衍生(sheng)產(chan)品(pin)檢測(ce)，動物(wu)飼(si)料(liao)、化妝(zhuang)品(pin)、食品(pin)衛生(sheng)檢(jian)測(ce)，轉基因作(zuo)物(wu)與(yu)轉基因微(wei)生(sheng)物(wu)檢(jian)測(ce)等。

壹(yi)、PCR實驗(yan)室(shi)布局(ju)

PCR實驗(yan)室(shi)原則(ze)上為(wei)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)、擴(kuo)增(zeng)區(qu)和擴增(zeng)產(chan)物分析(xi)區(qu)四(si)個(ge)單(dan)獨(du)的(de)工作區(qu)域(yu)並(bing)設(she)有走廊(lang)，各工作區(qu)域(yu)應(ying)設(she)緩(huan)沖(chong)間，工作區(qu)與(yu)緩(huan)沖(chong)間宜安裝連鎖裝(zhuang)置(zhi)。不同功能(neng)的(de)工作區(qu)應(ying)是分隔(ge)獨(du)立的(de)，各(ge)工作區(qu)有明顯(xian)的(de)標誌(zhi)，不能(neng)直通(tong)，如(ru)果(guo)緊(jin)密相(xiang)連，需(xu)安裝物品(pin)傳遞(di)窗。前兩(liang)區(qu)為(wei)擴增(zeng)前區(qu)，後(hou)兩(liang)區(qu)為(wei)擴增(zeng)後(hou)區(qu)，擴(kuo)增(zeng)前區(qu)與(yu)擴增(zeng)後(hou)區(qu)應(ying)嚴(yan)格(ge)分開(kai)。實驗(yan)材料、試(shi)劑、記錄紙(zhi)、筆、清(qing)潔材料等，只能(neng)從(cong)擴增(zeng)前區(qu)流(liu)向(xiang)擴(kuo)增(zeng)後(hou)區(qu)，即(ji)從(cong)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu)→樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)→擴(kuo)增(zeng)區(qu)→擴(kuo)增(zeng)產(chan)物分析(xi)區(qu)，不得逆向流(liu)動(dong)。實驗(yan)室(shi)的氣(qi)流也(ye)應從(cong)擴增(zeng)前區(qu)流(liu)向(xiang)擴(kuo)增(zeng)後(hou)區(qu)，不得逆向流(liu)動(dong)。各(ge)工作區(qu)頂(ding)部應(ying)安裝紫外燈(deng)，紫外燈(deng)的(de)波長為(wei)254nm，每20㎡壹(yi)支40W的(de)紫外燈(deng)。

二、實驗(yan)室(shi)各區(qu)功(gong)能(neng)及(ji)主(zhu)要(yao)設(she)備(bei)

1、試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu):主(zhu)要(yao)進(jin)行試(shi)劑的制(zhi)備(bei)、分裝(zhuang)和主反(fan)應(ying)混(hun)合液(ye)的(de)制(zhi)備(bei)。試(shi)劑和用於(yu)樣(yang)品(pin)制(zhi)作(zuo)的材料應直接運(yun)送至該(gai)區(qu)，不得經過其它(ta)區(qu)域(yu)。試(shi)劑原材料必須(xu)貯(zhu)存(cun)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)，並(bing)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)制(zhi)備(bei)成所(suo)需的(de)試(shi)劑。本區(qu)主(zhu)要(yao)設(she)備(bei)有天平(ping)、冰箱(xiang)、離心機(ji)、加(jia)樣(yang)器、振(zhen)蕩器等。

對(dui)於(yu)氣(qi)流壓(ya)力的(de)控制(zhi)，本(ben)區(qu)並(bing)沒(mei)有嚴格(ge)的(de)要(yao)求(qiu)。

2、樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu):主(zhu)要(yao)進(jin)行樣(yang)品(pin)的保(bao)存(cun)、核酸(suan)(RNA、DNA)提(ti)取、貯(zhu)存(cun)及(ji)其加入至(zhi)擴增(zeng)反(fan)應(ying)管和測(ce)定DNA的(de)合成。本(ben)區(qu)主(zhu)要(yao)設(she)備(bei)有冰箱(xiang)、生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃、離心機(ji)、加(jia)樣(yang)器、振(zhen)蕩器、恒(heng)溫(wen)水浴等。

本區(qu)的(de)壓(ya)力梯度要(yao)求(qiu)為(wei):相(xiang)對(dui)於(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)域(yu)為(wei)正壓(ya)，以避免(mian)從(cong)鄰(lin)近(jin)區(qu)進(jin)入本(ben)區(qu)的(de)氣(qi)溶(rong)膠汙染。

3、擴(kuo)增(zeng)區(qu):主(zhu)要(yao)進(jin)行DNA擴(kuo)增(zeng)。此(ci)外，已(yi)制(zhi)備(bei)的DNA模板(ban) (來(lai)自(zi)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu))的(de)加(jia)入和主反(fan)應(ying)混(hun)合液(ye)(來(lai)自(zi)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu))制(zhi)備(bei)成反(fan)應(ying)混(hun)合液(ye)等(deng)也(ye)可在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)進(jin)行。本(ben)區(qu)主(zhu)要(yao)設(she)備(bei)有:擴增(zeng)儀(yi)、冰箱(xiang)、離心機(ji)、加(jia)樣(yang)器等(deng)。

本(ben)區(qu)的(de)壓(ya)力梯度要(yao)求(qiu)為(wei):相(xiang)對(dui)於(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)域(yu)為(wei)負(fu)壓(ya)，以避免(mian)氣(qi)溶(rong)膠從(cong)本區(qu)漏(lou)出。

4、擴增(zeng)產(chan)物分析(xi)區(qu):擴(kuo)增(zeng)產(chan)物的(de)測(ce)定。本(ben)區(qu)主(zhu)要(yao)設(she)備(bei)有酶標儀(yi)、洗板(ban)機(ji)、加(jia)樣(yang)器和水浴箱等。

本區(qu)的(de)壓(ya)力梯度的(de)要(yao)求(qiu)為(wei):相(xiang)對(dui)於(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)域(yu)為(wei)負(fu)壓(ya)，以避免(mian)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物從(cong)本(ben)區(qu)擴(kuo)散(san)至(zhi)其它(ta)區(qu)域(yu)。

三(san)、PCR實驗(yan)室(shi)通(tong)風系(xi)統(tong)及(ji)壓(ya)力控制(zhi)

各(ge)區(qu)域(yu)之(zhi)間應(ying)具備(bei)單(dan)向的實驗(yan)工藝流、物(wu)流(liu)、人(ren)流與(yu)氣(qi)流，形(xing)成單(dan)向流程的保(bao)護(hu)屏障，避免(mian)實驗(yan)之(zhi)間的(de)相(xiang)互幹(gan)擾，防(fang)止氣(qi)溶(rong)膠擴(kuo)散對(dui)實驗(yan)過程造成汙染。

PCR實驗(yan)室(shi)並(bing)沒(mei)有嚴格(ge)的(de)凈化要(yao)求(qiu)，但是為(wei)避免(mian)各個(ge)實驗(yan)區(qu)域(yu)交(jiao)叉(cha)汙染的(de)可能(neng)性(xing)，宜采用全(quan)送全(quan)排的氣(qi)流組(zu)織形(xing)式(shi)，嚴(yan)格(ge)控制(zhi)送、排風的(de)比例(li)以(yi)保證(zheng)各實驗(yan)區(qu)的(de)壓(ya)力要(yao)求(qiu)。

四、PCR實驗(yan)室(shi)裝飾(shi)

實驗(yan)室(shi)圍護結(jie)構(gou)應牢固(gu)、氣(qi)密性好(hao);所(suo)有陰(yin)陽角(jiao)宜采用圓(yuan)弧(hu)過渡;墻體內(nei)壁(bi)光潔、不積(ji)塵(chen)、耐(nai)腐蝕(shi)、易清洗消毒(du);地面使用PVC卷材或(huo)環氧(yang)樹(shu)脂自(zi)流(liu)坪，材料應滿(man)足(zu)無(wu)縫(feng)隙、無(wu)滲漏、光潔、耐(nai)腐(fu)蝕(shi)的要(yao)求(qiu)。

五(wu)、PCR實驗(yan)室(shi)註意事項(xiang)

1、幾個區(qu)域(yu)的(de)大(da)小設(she)置(zhi)情況(kuang)，試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu)、擴(kuo)增(zeng)區(qu)、擴(kuo)增(zeng)產(chan)物分析(xi)區(qu)，空間相(xiang)對(dui)小壹些(xie)，樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)要(yao)放(fang)置生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃和低溫(wen)冰箱(xiang)，空間應(ying)大(da)壹(yi)些(xie)。

2、試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)設(she)緊(jin)急(ji)洗眼(yan)器(qi)，以(yi)保證(zheng)操作人(ren)員(yuan)的安全(quan)。

3、PCR實驗(yan)室(shi)沒有嚴格(ge)的(de)凈化要(yao)求(qiu)，根據(ju)用戶的使(shi)用情況(kuang)和資(zi)金(jin)的(de)投入選擇(ze)。